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PHD : Parasites, Hosts and Diseases

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Influenza M1 Virus-Like Particles Consisting of Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 4

The Korean Journal of Parasitology 2017;55(2):143-148.
Published online: April 30, 2017

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2Department of Emergency, Yanbian University Hospital, Yanji City, P. R. 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3Department of Medical Zoology, Kyung Hee University School of Medicine, Seoul 02447, KoreaÿØÿàJFIFddÿìDuckydÿáqhttp://ns.adobe.com/xap/1.0/ ÿîAdobedÀÿÛ„ÿÀŠÿÄ     ! 1AQa"q� 2#w8ð‘¡ÁÑB3´µ6v¶7×X±Rr²$˜9áñb’C³Ãt%u&–ÖW·‚s'(xy¢ÂÓ4T”5f‡—ÇH¨¸Ø  !1AQaq"�‘¡2B ±ÁRbr#³´u67ðѲ3sTt5v8áñâSc$4Ä‚’¢C“ÔÔ%UÕÂÒÓ…•FVÅÿÚ ?ßàêÓ_A÷ú‹× ­j- ŠHÌûû>‚>Ì,šm*>½ôßÈÞfzp"áõö—£Téõ‹£—Ær÷Kkr¾ÒÙî��âœ^× »Òr.|_&€ã]¿|*œ™v¿P¶²uܶv”o‡±¿QÇ1Ÿ ¾�ŒŸmÍëw¾VJUöhu-ãIð"=L‹‡n§õ‘iù½AÆ•8Úö�"ûÛ²½þ„� ák�*Ò¿[yùu:ý.Ž‚v«U¤ÒÚQ+•)Ñá%F� D•Hy²V‡è×B훩kš>‘Hêy8øÓj©Ý¹ q~§9Dúñ4íKR‚þm±zõÚíQ„¥ßö)µ^Ê”Ó.J%k_tVi5NTê¥Ójg!'¡k©Çy|5as…¨ðÃOÏÁÈ»)R–¯Û¸ß©FMÔ¿3LÕ4çj¹6dÖùÚœ#êNIwUF©•]J ûq¡BŒô¹/(ËF™aãŠâfJöRzq3à\GÕ›™ ?ö~\£ 6å)6èý•Wµµ4¶m[O›ö^L0ìEË&r¤RMïØ¶*º×ÑC .ÍÂ]Un·l¥Š-1— 1ßr#Rj/¥´ø¯&QɈ׉˩·ás6­Rj=5Tgæ.´êy™.·PÓ¡:ÖJJíS«…÷:îßC8èÝ-Äù„2u]–d�&¢é»Òvøª·Uºz;¾»7p·9‘˜» 5Všã‰nLÖ¢µ£”¢"y)Ц">Ói×™Ñ(ûIDDd|œ¹Ö Yj0·­; L›§ãR¯fÙÞàÝS�˜:k¥ÚÃñtYäK%*ÒN2^ômñ|&dÄŸthó":‡ãÊe§Øy¾)u§P—¶ôQó¡ZöðW)gcC3Pv&“M¾ÇéM¯„ÂWìÏì¬d&¯Å´ãÛ²½�mvŸT¹èRoÞÕªM0Ü3ä*…F3Yº›dûèæãýÃ6¡®èÚ\8õ,¼\h÷Ý» kß”‘õâi¶¡<k× žÞNTõð¦wSëÔªº­Ñmljö•’j[>->±p£tU©Ôâ�%¯'§L‹R>&EÇBïôH$ßÝý�§ÉMQAU¶x[›$Z6’ÒÍv®Ôi&’_“a.K˜IQ{äh©yÆ’½ ’j"JùOCá ê×9òö—ìeäFŒªÒ�´ÞÿfŽjµîí;™ËšÎ©<[3”_m%ÃïÑ÷ ·•l‹¦Q@¥Ö4œ³Ñg²ü�=5$°™(J]YëÁ®c-OMqé<÷ÊÚõÇ�‡“ wSø²�¨¹z’œ«ïÚ—)kš$ÜË7ªV©I¥ïÅPý붾ͯnV+卵*t]i‚ÐŽD¥31ñí~S¨Añí1ûéÃCÐ2u)ÑÂʼnΛãQn-UÅoîi÷3ò´�:®«gß»rI8ý¯ÊØ“Wm*G zà«Ü•)ZÌ×§J}Åê§Yµ Y“lGeJ6ØcB2I ‹NS3×Qµ>kÔõÞ=KT›½ÅBëœâ—ÆÙÎT]ŠŽž‚W鿇¢ÂÞ6œ¬«Ü+ãSÓÛ¦ööï÷Ož—X©QgG©R¦? 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*Corresponding authors (fsquan@khu.ac.kr)
• Received: December 28, 2016   • Revised: March 2, 2017   • Accepted: March 11, 2017

Copyright © 2017 by The Korean Society for Parasitology and Tropical Medicine

This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

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Influenza M1 Virus-Like Particles Consisting of Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 4
Korean J Parasitol. 2017;55(2):143-148.   Published online April 30, 2017
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Influenza M1 Virus-Like Particles Consisting of Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 4
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Fig. 1 PCR amplification of T. gondii ROP4 (A) and influenza M1 genes (B). T. gondii ROP4 (1,728 bp) gene was RCR-amplified from cDNA synthesized using a Prime Script 1st Strain cDNA Synthesis Kit using total RNA extracted from T. gondii RH. Influenza M1 gene was PCR amplified from total RNA extract from influenza virus (A/PR/8/34). M, DNA marker; TgROP4, T. gondii ROP4; M1, influenza M1.
Fig. 2 Construction of pFastBac vectors. T. gondii ROP4 gene and influenza M1 were cloned into the pFastBac with SphI/KpnI and EcoRI/XhoI enzymes, respectively, resulting in pFastbac plasmids containing T. gondii ROP 4 (A) or M1 (B).
Fig. 3 Production of virus-like particles (VLPs). pFastBac plasmids containing ROP4 or M1 were transfected into Sf9 cells, respectively, and baculoviruses expressing T. gondii ROP4 or influenza M1 were generated. Recombinant baculovirus was coinfected into Sf9 cells, and the VLPs were produced. A, Normal SF9 cells; B, VLP-producing cells.
Fig. 4 Electron microscopy examination. Transmission electronic microscopy was used to characterize M1 VLPs morphologically. Negative staining electron microscopy of influenza M1 VLPs was performed. A, Diagram of the M1 VLPs; B, M1 VLPs containing T. gondii ROP 4 under EM.
Fig. 5 Reactivity of M1 VLPs with T. gondii antibody by western blot. A total of 40, 8, and 1.6 μg of M1 VLPs were loaded per lane. Polyclonal mouse anti-T. gondii (ME49) antibody was used to probe T. gondii ROP4 protein (63kD), and monoclonal anti-M1 antibody was used to probe influenza M1 protein (28kD). Thus, T. gondii ROP4 (TgROP4) and influenza M1 proteins were identified, respectively, by western blot.
Fig. 6 M1 VLPs as a coating antigen reacted with T. gondii antibody. Mice were infected with T. gondii (ME49) and 1 month later, mouse sera were collected. M1 VLPs were coated onto 96-well plates, and collected sera were serially diluted and used as a primary antibody to determine IgG antibody responses using ELISA. Higher levels of IgG antibody responses were detected when M1 VLPs as coating antigens.
Fig. 7 IgG cross-reactivity of M1 VLPs containing T. gondii ROP4 with Plasmodium berghei-infected mouse sera. M1 VLPs containing T. gondii ROP4 were coated onto 96-well pates, and P. berghei-infected mouse sera were used as primary antibodies. Then, IgG cross-reactivity was determined using ELISA. A higher level of IgG cross-reactivity of M1 VLPs with P. berghei-infected sera was detected when M1 VLPs as coating antigens (*P< 0.05).
Influenza M1 Virus-Like Particles Consisting of Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 4